才能滿足新細(xì)胞合成、細(xì)胞代謝等生化反應(yīng)所需要的物質(zhì)和能量。細(xì)胞培養(yǎng)基的主要成份是水、氨基酸、維生素、碳水化合物、無(wú)機(jī)鹽和其它一些輔助營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)等。此外，還可能含有血清、血清替代成分、pH指示劑等。水是細(xì)胞的主要成份，也是細(xì)胞賴以生存的主要環(huán)境。細(xì)胞培養(yǎng)液中90%以上的成份是水。細(xì)胞對(duì)水的品質(zhì)非常敏感，水的品質(zhì)將直接影響細(xì)胞培養(yǎng)的效果。而水中通常含有重金屬、氯、磷、有機(jī)物、熱原等污染物，細(xì)胞培養(yǎng)用水須經(jīng)過(guò)純化，品質(zhì)應(yīng)符合***典注射用水標(biāo)準(zhǔn)或者超純水的標(biāo)準(zhǔn)。能源和碳源是用于維持細(xì)胞生命和支持細(xì)胞生長(zhǎng)，主要包括糖、糖酵解的產(chǎn)物和谷氨酰胺，其他氨基酸是次要的能源和碳源物質(zhì)。細(xì)胞能夠利用的糖類主要是六碳糖，目前大多體外培養(yǎng)時(shí)選取葡萄糖作為細(xì)胞的主要碳源和能量來(lái)源，因此細(xì)胞培養(yǎng)基中基本都含有葡萄糖，含量一般為5～25mmol/L。在葡萄糖濃度較高時(shí)，細(xì)胞主要通過(guò)擴(kuò)散作用吸收葡萄糖，細(xì)胞膜內(nèi)外的葡萄糖濃度梯度是細(xì)胞吸收葡萄糖的動(dòng)力；在葡萄糖濃度較低時(shí)，主要由鈉離子推動(dòng)的高親和性轉(zhuǎn)運(yùn)過(guò)程使細(xì)胞攝取葡萄糖。葡萄糖進(jìn)入細(xì)胞后參與糖酵解、核酸代謝、糖原合成、能量代謝以及一些氨基酸的合成。與體內(nèi)的能量供應(yīng)途徑不同。MEM培養(yǎng)基含有必要的氨基酸和維生素。吉林減血清培養(yǎng)基哪家好

    又能使培養(yǎng)基的破壞降低至比較低的工藝條件。許多實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果表明，培養(yǎng)基在高溫**的過(guò)程中，其營(yíng)養(yǎng)成分的破壞在很大程度上可以用一級(jí)反應(yīng)來(lái)描述其反應(yīng)速度：式中—表示營(yíng)養(yǎng)成分破環(huán)的速率，C：表示營(yíng)養(yǎng)成分的濃度K'：為反應(yīng)速度常數(shù)，1/s，應(yīng)速度常數(shù)K'與溫度的關(guān)系，可以使用阿累尼烏斯公式表示之：K'=A'exp-△E'/RT……（1）式中——：反應(yīng)速度常數(shù)，1/S：反應(yīng)的活化能（J/mol）R：氣體常數(shù)，*J/mol*kT：反應(yīng)的***溫度，k同樣，**過(guò)程中的反應(yīng)速度常數(shù)也可以用下式表示出：K=A×exp[-E/RT]……（2）（1）、（2）式可以改寫成下列形式：lg(k,2/k,1)=E,/R×(1/T1–T2)……（3）lg(k2/k1)=E/R×(1/T1–T2)……（4）（3）（4）的意義是指：反應(yīng)的溫度從T1升高到T2，其反應(yīng)的速度常數(shù)分別從k,1增加到k,2；k1增加到k2；培養(yǎng)基的**過(guò)程實(shí)際上是營(yíng)養(yǎng)成分破壞、菌體死亡的兩個(gè)平行性反應(yīng)，對(duì)于平行性反應(yīng)，反應(yīng)溫度的提高，其兩個(gè)平行性反應(yīng)的速度常數(shù)都增加，但增加的幅度（大小）卻不同，其比值可以表示為：lg(k2/k1)/lg(k,2/k,1)=E/E,……(5)實(shí)驗(yàn)證明：營(yíng)養(yǎng)成分為破壞的反應(yīng)的活化能E的值為E,=—*103J/mol；而菌體死亡的活化能E芽孢：E=418*103J/mol。山東MEM a培養(yǎng)基供應(yīng)商使用減血清培養(yǎng)基能減少細(xì)胞應(yīng)激反應(yīng)。

    第三節(jié)**的代謝與培養(yǎng)基新陳代謝(metabolism)足生物有機(jī)體基本的特征之一，是生命活動(dòng)中一切生化反應(yīng)的總稱。它包括物質(zhì)的分解和物質(zhì)的合成過(guò)程。**吸收了外界的營(yíng)養(yǎng)，在酶的作用下將其分解，再在酶的作用下臺(tái)成**菌體的成分。分解與合成兩個(gè)過(guò)程伴同發(fā)生，緊密相關(guān)，維持了**細(xì)胞的生命，進(jìn)行**的生長(zhǎng)。通過(guò)檢測(cè)**系統(tǒng)及代謝產(chǎn)物的生理，來(lái)鑒定**的試驗(yàn)稱生化試驗(yàn)。生化試驗(yàn)可分為糖代謝試驗(yàn)、蛋白質(zhì)代謝試驗(yàn)、鹽利用試驗(yàn)和呼吸酶類斌驗(yàn)4種。l.代謝試驗(yàn)①氧化發(fā)酵試驗(yàn)O-F；②糖（醇）類發(fā)酵試驗(yàn)；③VP和甲基紅試驗(yàn)2.蛋白質(zhì)代謝試驗(yàn)①蛋白水解試驗(yàn)；②硫化氫試驗(yàn)；③吲哚試驗(yàn)；④脫羧酶試驗(yàn)；③脫氨試驗(yàn)；⑥尿素酶試驗(yàn)。3.鹽類代謝試驗(yàn)①枸櫞酸鹽試驗(yàn)；②丙二酸鹽利用試驗(yàn)；③硝酸鹽還原試驗(yàn)4．呼吸酶類試驗(yàn)①氧化酶試驗(yàn)；②細(xì)胞色素氧化酶試驗(yàn)表IMVIC試驗(yàn)對(duì)腸桿菌屬的鑒別作用菌名吲哚（I）甲基紅（M）VP（Vi）枸櫞酸鹽。

    培養(yǎng)實(shí)例7和對(duì)比培養(yǎng)例7的誘導(dǎo)結(jié)果比較：：用上述方法進(jìn)行水稻成熟胚愈傷**誘導(dǎo)時(shí)，cs誘導(dǎo)培養(yǎng)基與ms誘導(dǎo)培養(yǎng)基誘導(dǎo)出的愈傷**形態(tài)大小均相近，出愈率均為100％。如圖7所示。培養(yǎng)實(shí)例8：液體培養(yǎng)基在植物水培中的應(yīng)用(1)用不同ph的超純水配制的液體培養(yǎng)基ph值穩(wěn)定性比較：a、用不同ph的超純水配制液體培養(yǎng)基：通常多種因素會(huì)導(dǎo)致相同超純水制水機(jī)產(chǎn)出的超純水ph變動(dòng)較大，ph通常為。分別選取ph為、、、、、，分別配制ms液體培養(yǎng)基、cs液體培養(yǎng)基、1/2ms液體培養(yǎng)基、1/2cs液體培養(yǎng)基，制作方法為：ms液體培養(yǎng)基為取ms基本培養(yǎng)基置于不同ph的超純水中溶解并定容至1l；cs液體培養(yǎng)基為取cs基本培養(yǎng)基置于不同ph的超純水中溶解并定容至1l；1/2ms液體培養(yǎng)基為取1/2ms基本培養(yǎng)基置于不同ph的超純水中溶解并定容至1l；1/2cs液體培養(yǎng)基為取1/2cs基本培養(yǎng)基置于不同ph的超純水中溶解并定容至1l。b、結(jié)果為：用ph為，ms液體培養(yǎng)基ph為，cs液體培養(yǎng)基ph為，1/2ms液體培養(yǎng)基ph為，1/2cs液體培養(yǎng)基ph為。植物**適宜生長(zhǎng)的ph一般為，觀察可知，ms液體培養(yǎng)基及1/2ms液體培養(yǎng)基的ph偏酸性且波動(dòng)較大，其應(yīng)用于液體培養(yǎng)基時(shí)通常需要調(diào)節(jié)ph，過(guò)程繁瑣，相比之下。MEM培養(yǎng)基適用于多種哺乳動(dòng)物細(xì)胞的體外培養(yǎng)和實(shí)驗(yàn)研究。

    平衡鹽溶液（balancedsaltsolution，BSS）簡(jiǎn)稱鹽溶液，集緩沖液的緩沖能力、生理鹽水的等滲性以及培養(yǎng)液的營(yíng)養(yǎng)供應(yīng)特點(diǎn)于一體，兼具維持滲透壓、緩沖和調(diào)節(jié)溶液的酸堿度、同時(shí)供給細(xì)胞生存所必需的能量和無(wú)機(jī)離子成分的作用。各種BSS的緩沖系統(tǒng)有所不同，其中以Hank’s液和Earle’s液為例，它們主要差別在于碳酸氫鈉的水平,在Earle’s(g/L)中比在Hank’s(g/L)中高。碳酸氫鈉需用高水平的CO2平衡，以維持溶液的pH值。Eagles液在空氣水平的CO2中，溶液會(huì)變堿，Hank’s液在CO2培養(yǎng)箱中會(huì)變酸。如果希望在CO2培養(yǎng)箱中保存**，需要用Earle’s液，。如果**是清洗將要在細(xì)胞培養(yǎng)基中儲(chǔ)存的**，用Hank’s液就可以了。表3-1幾種常用的平衡鹽溶液配方（g/L）一些BSS含有的Ca2+、Mg2+是細(xì)胞膜的重要組成成分，同時(shí)參與許多重要的細(xì)胞功能活動(dòng)。但它們有使細(xì)胞凝集的作用，在配制分散細(xì)胞的消化液和特殊用途的細(xì)胞洗滌時(shí)，宜采用Ca2+、Mg2+含量較低的Dulbecco液或無(wú)Ca2+、Mg2+的D-Hanks液，或者PBS液。概述基礎(chǔ)細(xì)胞培養(yǎng)基主要包括199、MEM、RPMI-1640、DMEM、DMEM/F12等。主要成分是氨基酸、維生素、碳水化合物、無(wú)機(jī)鹽和其它一些輔助物質(zhì)。RPMI1640培養(yǎng)基能夠提高細(xì)胞的存活率。吉林減血清培養(yǎng)基哪家好

F12培養(yǎng)基適用于神經(jīng)細(xì)胞和其他敏感細(xì)胞系。吉林減血清培養(yǎng)基哪家好

    二氧化碳不斷被釋放，培養(yǎng)液變酸，pH值發(fā)生變化。酚紅是細(xì)胞培養(yǎng)基中**常用的pH指示劑，但依靠細(xì)胞培養(yǎng)基中的酚紅等pH指示劑進(jìn)行判斷，需要實(shí)驗(yàn)員的經(jīng)驗(yàn)積累，存在較大的主觀性。實(shí)際上，個(gè)性化細(xì)胞培養(yǎng)基或是無(wú)血清細(xì)胞培養(yǎng)基中酚紅含量較少或是不含酚紅，只能通過(guò)pH計(jì)或者pH電極進(jìn)行pH值的檢測(cè)，結(jié)果更為準(zhǔn)確可靠。緩沖能力細(xì)胞培養(yǎng)基應(yīng)具有一定的緩沖能力。細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中造成細(xì)胞培養(yǎng)液pH波動(dòng)的主要物質(zhì)是細(xì)胞代謝產(chǎn)生的CO2。在封閉式培養(yǎng)過(guò)程中CO2與水結(jié)合產(chǎn)生碳酸，細(xì)胞培養(yǎng)液pH很快下降；打開培養(yǎng)器具時(shí)CO2逸出則會(huì)引起pH升高。細(xì)胞培養(yǎng)基通常采用NaHCO3-CO2緩沖系統(tǒng)，按下列化學(xué)反應(yīng)方程式調(diào)節(jié)細(xì)胞培養(yǎng)基的pH值：H2O+CO2→H2CO3?H++HCO3－NaHCO3?Na++HCO3－此外，還有緩沖能力較高的磷酸鹽緩沖系統(tǒng)。但碳酸鹽緩沖系統(tǒng)的細(xì)胞毒性小、成本低，在細(xì)胞培養(yǎng)中應(yīng)用得更為***。另一種較為常用的緩沖液是HEPES（羥乙基哌嗪乙硫磺酸）液，它是一種非離子兩性緩沖液，在pH~。高濃度的HEPES可能對(duì)細(xì)胞**性作用，細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)HEPES的添加濃度一般為10～25mmol/L。滲透壓細(xì)胞必須生活在等滲的環(huán)境中，大多數(shù)體外培養(yǎng)的細(xì)胞對(duì)滲透壓有一定耐受性。研究顯示。吉林減血清培養(yǎng)基哪家好