二代測序——轉錄組測序的實驗流程（下）

測序

根據研究需求和預算選擇合適的測序平臺，如 Illumina 測序平臺。它的測序原理主要是邊合成邊測序（SBS）。在測序過程中，dNTP（脫氧核糖核苷三磷酸）帶有不同顏色的熒光標記，當新的 dNTP 加入到正在合成的 DNA 鏈時，通過檢測熒光信號來確定堿基類型，從而讀取 cDN**段的序列。測序深度（覆蓋度）也是一個重要參數，一般來說，測序深度越高，檢測到的低表達轉錄本的概率就越大，但成本也會相應增加。

數據分析

數據質量控制是**步，要去除低質量的 reads（如含有較多不確定堿基 “N” 的 reads）和接頭序列。然后將高質量的 reads 比對到參考基因組或轉錄組上，常用的比對軟件有 TopHat、STAR 等。在確定了 reads 的位置后，就可以計算轉錄本的表達量，常用的方法有 RPKM（Reads Per Kilobase of exon model per Million mapped reads）、FPKM（Fragments Per Kilobase of exon model per Million mapped fragments）等。此外，還可以進行差異表達分析，找出在不同樣本條件下（如疾病組和健康組）表達量有***差異的轉錄本，用于后續的功能注釋和通路分析，了解這些轉錄本可能參與的生物學過程和信號通路。 二代測序的流程有哪些？江蘇哪里有二代測序應用

二代測序—全外顯子測序的局限性

不能檢測所有的遺傳變異：它只能檢測外顯子區域的變異，對于非外顯子區域（如內含子、基因間區域）的變異無法檢測，而這些區域的某些變異也可能對基因的表達和功能產生重要影響，如內含子中的突變可能影響基因的剪接。

數據分析復雜：全外顯子測序會產生大量的數據，需要復雜的生物信息學工具和方法來進行數據分析。包括數據的質量控制、變異的檢測和注釋、致病性的評估等多個環節，其中任何一個環節出現問題都可能導致錯誤的結論。 河北哪里有二代測序檢測二代測序常用于醫學篩查或診斷。

二代測序技術在不同人群中的準確性有何差異④

***性疾病患者

優勢：病原學二代測序可準確檢測病原體的基因序**定病原體種類和基因型，為***性疾病的診斷和***提供依據，在檢測罕見病原體、病毒***等方面具有獨特優勢，有助于快速明確診斷，尤其是對于一些傳統檢測方法難以診斷的***性疾病，如不明原因的發熱、肺炎、腦膜炎等。

局限性：對于低豐度病原體，可能出現假陽性或假陰性結果。樣本質量、測序深度和數據分析方法等因素也會影響準確性，若樣本中病原體含量低或雜質多，可能導致檢測失敗或結果不準確

二代測序技術的一些***研究進展①

疾病診斷與***領域 ：消化系統**標志物檢測：2024 年的**共識指出，二代測序（NGS）技術可同時檢測消化系統**中的多種標志物，如錯配修復基因變異、微衛星不穩定性（MSI）狀態、**突變負荷（TMB）等，為**的精細***提供了更***、準確的信息。例如，MSI-H 的實體瘤患者可使用帕博利珠單抗進行***，而 NGS 技術能更好地檢測 MSI 狀態及相關耐藥機制。

**液體活檢：通過檢測血液中的循環** DNA（ctDNA）等標志物，實現對**的早期篩查、診斷和***監測。NGS 技術能夠更敏感地檢測到 ctDNA 中的基因突變和變異，為**的無創診斷提供了有力支持。

二代測序通量大，可以產生上G的reads.

二代測序——轉錄組測序的背景和基本原理

1、背景：在基因表達過程中，DNA 轉錄為 RNA，轉錄后的 RNA 會經過一系列加工，包括剪接等過程形成成熟的 mRNA，然后進行翻譯產生蛋白質。轉錄組測序可以讓我們在全基因組范圍內研究基因的表達情況，相比于傳統的基因表達研究方法（如芯片技術），它具有更高的分辨率和更廣的檢測范圍。

2、原理：首先從樣本（如細胞、組織）中提取總 RNA，然后將 RNA 反轉錄為 cDNA（互補 DNA）。這些 cDNA 會構建測序文庫，在文庫中加入特定的接頭序列，以便后續在測序平臺上進行測序。測序過程中，測序儀會讀取 cDN**段的堿基序列信息。通過生物信息學分析，將這些短序列（reads）比對到參考基因組或進行從頭組裝（如果沒有參考基因組），從而確定轉錄本的序列和表達量。 二代測序的優勢是高靈敏度。江蘇哪里有二代測序應用

二代測序結果怎么分析？江蘇哪里有二代測序應用

二代測序技術在不同人群中的準確性有何差異③

孕婦及胎兒

優勢：無創產前篩查（NIPT）是二代測序技術用于孕期胎兒常見染色體非整倍體篩查的應用，對于唐氏綜合征、18-三體綜合征、13-三體綜合征等染色體異常疾病的檢測準確率分別能達到95%、85%、75%以上，明顯高于傳統血清學篩查。

局限性：孕婦外周血中胎兒游離DNA來源于胎盤滋養細胞，可能與胎兒實際情況不一致，導致假陽性。母親若合并免疫疾病、凝血功能障礙等，會使外周血中游離DNA含量過高，掩蓋胎兒來源的游離DNA，造成假陰性510. 江蘇哪里有二代測序應用

嘉安健達醫學科技（上海）有限公司匯集了大量的優秀人才，集企業奇思，創經濟奇跡，一群有夢想有朝氣的團隊不斷在前進的道路上開創新天地，繪畫新藍圖，在上海市等地區的醫藥健康中始終保持良好的信譽，信奉著“爭取每一個客戶不容易，失去每一個用戶很簡單”的理念，市場是企業的方向，質量是企業的生命，在公司有效方針的領導下，全體上下，團結一致，共同進退，齊心協力把各方面工作做得更好，努力開創工作的新局面，公司的新高度，未來嘉安健達醫學科技供應和您一起奔向更美好的未來，即使現在有一點小小的成績，也不足以驕傲，過去的種種都已成為昨日我們只有總結經驗，才能繼續上路，讓我們一起點燃新的希望，放飛新的夢想！